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1. 对于贴壁细胞或细胞涂片笔叠厂洗涤一次。

2. 如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。

3. 用4%多聚甲醛固定细胞15分钟，用笔叠厂洗涤一次。

4. 将切片移入湿盒中加入新鲜配制的3%双氧水,以去除内源性过氧化物酶封闭液，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗；

5. 滴加正常山羊血清封闭液，室温30分钟，甩去多余液体；

6. 滴加一抗工作液，37℃孵育2h（或4℃过夜），然后PBS充分淋洗；

7. 滴加兔/鼠二抗工作液，室温孵育1h，PBS充分淋洗；

8. DAB显色5-10分钟，在显微镜下掌握染色程度 ；

9. PBS或自来水冲洗1分钟 ；

10. 苏木精复染3分钟，盐酸酒精分化,反蓝；

11. 自来水冲洗1分钟 脱水、透明、封片、镜检。